إجراءات توحيد معايير غرف التعقيم ومواصفات القبول

1. الغرض: يهدف هذا الإجراء إلى توفير إجراء موحد للعمليات المعقمة وحماية الغرف المعقمة.

2. نطاق التطبيق: مختبر الاختبارات البيولوجية

3. الشخص المسؤول: مشرف مراقبة الجودة/المختبِر

4. التعريف: لا يوجد

5. احتياطات السلامة

يجب إجراء العمليات بطريقة معقمة تمامًا لمنع التلوث الميكروبي؛ وينبغي على المشغلين إطفاء مصباح الأشعة فوق البنفسجية قبل دخول الغرفة المعقمة.

6. الإجراءات

6.1. يجب أن تكون الغرفة المعقمة مجهزة بغرفة عمليات معقمة وغرفة عازلة. يجب أن تصل نظافة غرفة العمليات المعقمة إلى المستوى 10000. يجب الحفاظ على درجة الحرارة الداخلية بين 20 و24 درجة مئوية، والرطوبة بين 45 و60%. يجب أن تصل نظافة طاولة العمل النظيفة إلى المستوى 100.

6.2. يجب الحفاظ على نظافة الغرفة المعقمة، ويُحظر تمامًا تكديس المخلفات لمنع التلوث.

6.3. يجب منع تلوث جميع معدات التعقيم وأوساط الاستنبات بشكل صارم. ويجب التوقف عن استخدام أي معدات ملوثة.

6.4. يجب أن تكون الغرفة المعقمة مجهزة بمطهرات ذات تركيز فعال، مثل محلول الكريزول بنسبة 5٪، والكحول بنسبة 70٪، ومحلول الكلورميثيونين بنسبة 0.1٪، وما إلى ذلك.

6.5. يجب تعقيم الغرفة المعقمة وتنظيفها بانتظام باستخدام المطهر المناسب لضمان أن نظافة الغرفة المعقمة تفي بالمتطلبات.

6.6. يجب تغليف جميع الأدوات والأدوات والأطباق وغيرها من العناصر التي يجب إدخالها إلى الغرفة المعقمة بإحكام وتعقيمها بالطرق المناسبة.

6.7. قبل دخول الغرفة المعقمة، يجب على الموظفين غسل أيديهم بالصابون أو المطهر، ثم ارتداء ملابس العمل الخاصة والأحذية والقبعات والأقنعة والقفازات في غرفة التعقيم (أو مسح أيديهم مرة أخرى بالكحول الإيثيلي بتركيز 70%) قبل دخول الغرفة المعقمة. تُجرى العمليات في حجرة معقمة.

6.8. قبل استخدام غرفة التعقيم، يجب تشغيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية فيها لمدة تزيد عن 30 دقيقة للتعقيم، مع تشغيل جهاز نفخ الهواء في طاولة العمل النظيفة في الوقت نفسه. بعد انتهاء العملية، يجب تنظيف غرفة التعقيم فورًا ثم تعقيمها بالأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة.

6.9. قبل الفحص، يجب الحفاظ على الغلاف الخارجي لعينة الاختبار سليمًا وعدم فتحه لمنع التلوث. قبل الفحص، استخدم كرات قطنية مبللة بالكحول بنسبة 70% لتطهير السطح الخارجي.

6.10. خلال كل عملية، يجب إجراء فحص تحكم سلبي للتحقق من موثوقية العملية المعقمة.

6.11. عند امتصاص السائل البكتيري، يجب استخدام كرة شفط لامتصاصه. لا تلمس القشة مباشرة بفمك.

6.12. يجب تعقيم إبرة التلقيح باللهب قبل وبعد كل استخدام. بعد التبريد، يمكن تلقيح المزرعة.

6.13. يجب نقع القشات وأنابيب الاختبار وأطباق بتري وغيرها من الأدوات التي تحتوي على سائل بكتيري في دلو تعقيم يحتوي على محلول لايسول بنسبة 5٪ للتطهير، وإخراجها وشطفها بعد 24 ساعة.

6.14. في حال انسكاب سائل بكتيري على الطاولة أو الأرضية، يجب سكب محلول حمض الكربوليك بتركيز 5% أو محلول لايسول بتركيز 3% على المنطقة الملوثة فورًا لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل معالجتها. عند تلوث ملابس العمل والقبعات بالسائل البكتيري، يجب خلعها فورًا وغسلها بعد تعقيمها بالبخار عالي الضغط.

6.15. يجب تطهير جميع المواد التي تحتوي على بكتيريا حية قبل شطفها تحت الصنبور. ويُمنع منعاً باتاً تلويث المجاري.

٦.١٦. يجب فحص عدد المستعمرات في الغرفة المعقمة شهريًا. مع فتح طاولة العمل النظيفة، خذ عددًا من أطباق بتري معقمة بقطر داخلي ٩٠ مم، وحقن حوالي ١٥ مل من وسط أجار مغذي مُذاب ومُبرد إلى حوالي ٤٥ درجة مئوية. بعد التصلب، ضع الأطباق مقلوبة في حاضنة عند درجة حرارة ٣٠ إلى ٣٥ درجة مئوية لمدة ٤٨ ساعة. بعد التأكد من التعقيم، خذ من ٣ إلى ٥ أطباق وضعها على يسار ووسط ويمين منطقة العمل. بعد فتح الغطاء وتعريضها للضوء لمدة ٣٠ دقيقة، ضعها مقلوبة في حاضنة عند درجة حرارة ٣٠ إلى ٣٥ درجة مئوية لمدة ٤٨ ساعة، ثم أخرجها وافحصها. يجب ألا يتجاوز متوسط ​​عدد البكتيريا المتنوعة على الطبق في منطقة نظيفة من الفئة ١٠٠ مستعمرة واحدة، ويجب ألا يتجاوز متوسط ​​عددها في غرفة نظيفة من الفئة ١٠٠٠٠ ثلاث مستعمرات. في حالة تجاوز الحد المسموح به، يجب تطهير الغرفة المعقمة جيداً حتى تستوفي عمليات التفتيش المتكررة المتطلبات.

7. راجع الفصل (طريقة فحص التعقيم) في "طرق الفحص الصحي للأدوية" و "الممارسات التشغيلية القياسية الصينية لفحص الأدوية".

8. قسم التوزيع: قسم إدارة الجودة

إرشادات فنية خاصة بالغرف النظيفة:

بعد توفير بيئة ومواد معقمة، يجب الحفاظ على حالة التعقيم لدراسة كائن حي دقيق محدد أو الاستفادة من وظائفه. وإلا، فقد تختلط به كائنات دقيقة أخرى من الخارج بسهولة. تُعرف ظاهرة اختلاط الكائنات الدقيقة غير ذات الصلة من الخارج في علم الأحياء الدقيقة بالبكتيريا الملوثة. يُعد منع التلوث تقنية بالغة الأهمية في العمل الميكروبيولوجي. التعقيم الكامل من جهة، ومنع التلوث من جهة أخرى، جانبان من جوانب تقنية التعقيم. إضافةً إلى ذلك، يجب منع الكائنات الدقيقة قيد الدراسة، وخاصةً الكائنات الممرضة أو المعدلة وراثيًا التي لا توجد في الطبيعة، من التسرب من حاويات التجارب إلى البيئة الخارجية. ولتحقيق هذه الأهداف، توجد في علم الأحياء الدقيقة العديد من التدابير.

عادةً ما تكون الغرفة المعقمة غرفة صغيرة مُجهزة خصيصًا في مختبر الأحياء الدقيقة، ويمكن بناؤها باستخدام ألواح زجاجية. يجب ألا تتجاوز مساحتها 4-5 أمتار مربعة، وارتفاعها 2.5 متر تقريبًا. يجب إنشاء غرفة عازلة خارج الغرفة المعقمة، ويجب ألا يكون بابها مُواجهًا للغرفة المعقمة في نفس الاتجاه لمنع دخول البكتيريا من خلال تدفق الهواء. يجب أن تكون كلتا الغرفتين مُحكمتي الإغلاق، ويجب أن تحتوي أجهزة التهوية الداخلية على أجهزة ترشيح هواء. يجب أن تكون أرضية وجدران الغرفة المعقمة ناعمة، ويصعب تراكم الأوساخ عليها، ويسهل تنظيفها. يجب أن يكون سطح العمل مستويًا. تُجهز كلتا الغرفتين بمصابيح فوق بنفسجية، وتبعد هذه المصابيح مترًا واحدًا عن سطح العمل في الغرفة المعقمة. يجب على الموظفين الذين يدخلون الغرفة المعقمة ارتداء ملابس وقبعات مُعقمة.

توجد غرف التعقيم حاليًا في الغالب في مصانع الأحياء الدقيقة، بينما تستخدم المختبرات العامة طاولات نظيفة. تتمثل الوظيفة الرئيسية للطاولة النظيفة في استخدام جهاز تدفق الهواء الصفائحي لإزالة مختلف أنواع الغبار الدقيق، بما في ذلك الكائنات الدقيقة، من سطح العمل. يسمح الجهاز الكهربائي بمرور الهواء عبر مرشح هيبا ثم دخوله إلى سطح العمل، بحيث يبقى سطح العمل دائمًا تحت سيطرة تدفق الهواء المعقم. علاوة على ذلك، يوجد ستارة هوائية عالية السرعة على الجانب القريب من الخارج لمنع دخول الهواء الخارجي الملوث بالبكتيريا.

في الأماكن ذات الظروف الصعبة، يمكن استخدام صناديق خشبية معقمة بدلاً من طاولة العمل النظيفة. يتميز الصندوق المعقم ببنية بسيطة وسهولة النقل. يوجد فتحتان في مقدمة الصندوق، تُغلقان بأبواب تُفتح وتُغلق عند عدم الاستخدام. يمكن إدخال الذراعين أثناء العمل. الجزء العلوي من المقدمة مُغطى بالزجاج لتسهيل العمليات الداخلية. يوجد مصباح للأشعة فوق البنفسجية داخل الصندوق، ويمكن إدخال الأدوات والبكتيريا من خلال باب صغير على الجانب.

لا تقتصر أهمية تقنيات التشغيل المعقمة حاليًا على دورها المحوري في البحوث والتطبيقات الميكروبيولوجية فحسب، بل تُستخدم أيضًا على نطاق واسع في العديد من التقنيات الحيوية، مثل تقنية الكائنات المعدلة وراثيًا وتقنية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، وغيرها.